微孔外生物降呈混悬液

2.4 止血粉酶解结果分析

止血粉在37℃水中溶解度小，微孔外生物降呈混悬液。多聚100℃加热5min后，糖止分成上下两层，血粉析上层溶液澄清，成分下层少量止血粉呈现溶胀状态。及体解分此外，微孔外生物降若酶解产物的多聚保留时间为7.7min，说明产物为葡萄糖；若酶解产物的糖止保留时间为16.1min，说明产物为麦芽糖；保留时间为14.5min为α-淀粉酶中乳糖；其他保留时间的血粉析酶解产物为不同聚合度的寡糖。降解产物中葡萄糖、成分麦芽糖和乳糖的及体解分离子色谱峰面积见表2，降解产物中葡萄糖含量见表3，微孔外生物降降解产物中麦芽糖的多聚含量，如表4所示；止血粉α-淀粉酶降解不同时间后产物中未降解淀粉含量，糖止如表5所示。

因此，止血粉在37℃α-淀粉酶作用下，淀粉含量随着降解时间延长逐步减少，从即时的95.6%至48h的8.0%，1h内降解速率最大，约降解了67.3%。降解产物中除有葡萄糖单糖、麦芽糖双糖外，还有寡糖；离子色谱图中乳糖为α淀粉酶中物质，在降解的48h乳糖含量保持不变。100×10^-6止血粉在37℃α-淀粉酶作用下，葡萄糖的含量从即时的0至48h的4.004×10^-6，麦芽糖的含量从即时的0ppm至48h的44.692×10^-6，1h内麦芽糖生成速率最大，增加了36.509×10^-6。

3 结论

本研究是按照《可吸收止血产品注册技术审查指导原则》要求，在体外研究微孔多聚糖止血粉的成分以及生物降解，分别利用酸降解和生物降解法对微孔多聚糖止血粉进行体外降解研究。通过离子色谱法体外测定三氟乙酸降解微孔多聚糖止血粉生成的单糖，从而确定了止血粉的成分。随后采用离子色谱和分光光度法测定该止血粉在37℃、pH=6.9和Ca2+存在条件下，经过α-淀粉酶作用后所产生的葡萄糖，麦芽糖和淀粉含量，进一步确定止血粉的生物降解特性。在酸降解止血粉过程中，由于淀粉是葡萄糖分子聚合而成的，因此淀粉又被分为直链淀粉和支链淀粉两大类型。直链淀粉没有分支的螺旋结构，支链淀粉具有24～30个葡萄糖残基以α-1，4-糖苷键首尾相连而成，在支链处为α-1，6-糖苷键。所以经过酸降解后，能够形成单糖结构。本次所采用三氟乙酸降解止血粉的结果也表明得到的单糖皆为葡萄糖，且葡萄糖的含量为（54.3±1.5）×10-6，且淀粉中单糖为葡萄糖的含量为97.8%±2.6%。

在进行体外酶降解止血粉时，主要选用了血清淀粉酶，也被称之为淀粉内切酶，这是一种α-淀粉酶，在生物体内主要是由胰腺和唾液腺分泌。相关研究表明，α-淀粉酶从人唾液和猪胰腺中得到的α-淀粉酶的最适pH为6.0～7.0。此外，α-淀粉酶以Ca2+为必需因子并作为稳定因子，既可以作用于直链淀粉，又能够作用于支链淀粉，可以无差别地切断α-1,4-链。其特征主要是能够引起淀粉溶液黏度的急剧下降和碘反应的消失，最终分解直链淀粉时产物以麦芽糖为主，此外，还有麦芽三糖及少量葡萄糖；分解支链淀粉时，产物除麦芽糖、葡萄糖外，还生成分支部分具有α-1,6-键的α-极限糊精。止血粉在经过48h的体外α-淀粉酶的作用之后，所含淀粉含量逐渐降低，1h之内淀粉降解速率最大为67.3%，生物降解产物中除了含有单糖葡萄糖以外，还含有双糖麦芽糖以及少许寡糖分子。并且麦芽糖含量在1h之内的增加速率最大为81.69%。

对于此类微孔多聚糖止血材料的生物降解性研究也较多，Rong等对一种新型的止血栓塞复合生物材料可降解止血剂凝血酶负载的海藻酸钙微球（TACMs）进行研究，结果表明其可以在体内生物降解并且没有细胞毒性和全身毒性。Shi等对复合微孔多聚糖止血粉的体外研究也表明该类型止血材料具有良好的可降解性以及安全性。Tschan等研究证实微孔多聚糖止血材料在神经外科手术中也是十分安全有效的。并且Singh等的研究表明微孔多聚糖的止血效果比普通明胶基质的止血效果好。因此，认为这些生物来源、无毒、亲水性高、生物相容性和生物降解性良好的微孔多聚糖止血材料可以应用于临床及术中快速止血。而本研究所用到的微孔多聚糖止血粉在体外生物降解后，主要成分是葡萄糖及麦芽糖等，这些成分均是人体所需的能量物质，不会对机体产生毒性，体外代谢结果表明使用微孔多聚糖止血粉1h之内即可被机体所代谢，这也为今后微孔多聚糖止血粉在临床的使用提供了代谢依据。

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